New Techs fuldautomatiske nukleinsyreekstraktions- og detektionsmaskine

Fem styrker:
● Instrument konfigureret med nukleinsyreekstraktion og oprensede trin
● Instrument konfigureret med ultralydsekstraktionsmodul
● Instrument konfigureret med fuldautomatisk
● Instrument konfigureret med variabel temperaturforstærkning
● Instrument konfigureret med fuldt lukket reagenssæt

1. Skal nukleinsyredetektionsreagenser ekstraheres og oprenses?
Princippet for nukleinsyredetektion er som følger: under påvirkning af primer bruges DNA-polymerase til at udføre kædereaktionsforstærkning på template-DNA/RNA (kræver revers transkription af NA), og derefter detekteres mængden af ​​frigivet fluorescerende signal for at bestemme om prøven indeholder nukleinsyren (DNA/RNA) fra det patogen, der skal påvises.

1) Prøver, der ikke er blevet ekstraheret eller oprenset, kan indeholde mange komponenter, der påvirker det endelige resultat: nuklease (som kan opløse målnukleinsyren og forårsage falsk negativ), protease (som kan reducere DNA-polymerase og forårsage falsk negativ), tungmetal salt (som fører til inaktivering af syntase og forårsager falsk positiv ), for sur eller for basisk PH (hvilket kan få reaktionen til at svigte), ufuldstændig RNA (fører til falsk negativ revers transkriptionsfejl).

2) Nogle prøver er vanskelige at amplificere direkte: Gram-positive og nogle parasitter, på grund af deres tykke cellevægge og andre strukturer, hvis de ikke gennemgår nukleinsyreekstraktion og oprensningsprocessen, kan det ekstraktionsfrie kit mislykkes for sådanne prøver.

Derfor anbefales det at vælge testkittet eller instrumentet, der er konfigureret med nukleinsyreekstraktionstrinnet.

2. Kemisk ekstraktion eller fysisk ultralydsfragmenteringsekstraktion?
Generelt kan kemisk ekstraktion anvendes til det meste af forbehandlingen og oprensningen.Men i tykvæggede Gram-positive bakterier og nogle parasitter er det også tilfældet, at kemisk ekstraktion ikke kan opnå effektive nukleinsyreskabeloner, hvilket resulterer i falsk negativ påvisning.Derudover bruger kemisk ekstraktion ofte stærke midler, hvis elueringen ikke er grundig, er det let at indføre stærk alkali i reaktionssystemet, hvilket resulterer i unøjagtige resultater.

Ultralydsfragmentering bruger fysisk knusning, som med succes er blevet brugt af GeneXpert, en førende virksomhed inden for POCT til human brug, og har en absolut fordel ved nukleinsyreekstraktion af nogle komplekse prøver (såsom Mycobacterium tuberculosis).

Derfor anbefales det at vælge et testkit eller et instrument, der er konfigureret med et nukleinsyreekstraktionstrin.og det er optimalt, hvis der er et ultralydsekstraktionsmodul.

3. Manuel, halvautomatisk og fuldautomatisk?
Dette er et problem med lønomkostninger og arbejdseffektivitet.På nuværende tidspunkt er kæledyrshospitaler uden nok personale, og nukleinsyreekstraktion og påvisning et arbejde, der kræver visse færdigheder og erfaring.Der er ingen tvivl om, at den fuldautomatiske nukleinsyreekstraktions- og detektionsmaskine er det perfekte valg.

4. Konstant temperaturforstærkning eller variabel temperaturforstærkning?
Amplifikationsreaktionen er et nukleinsyredetektionslink, og den professionelle teknologi involveret i denne forbindelse er kompleks.Groft sagt bruges enzymer til at amplificere nukleinsyren.I forstærkningsprocessen detekteres det forstærkede fluorescenssignal eller det indlejrede fluorescenssignal.Generelt gælder det, at jo tidligere fluorescenssignalet vises, jo større er målgenindholdet i prøven.

Konstant temperaturamplfikation er en nukleinsyreamplfikation ved en fast temperatur, mens variabel temperaturampfikation er en cyklisk amplfikation strengt efter denaturering-annealing-forlængelse.Den konstante temperaturforstærkningstid er blevet udført, mens variabel temperaturforstærkningstid i høj grad påvirkes af instrumentets temperaturstigning og -fald (på nuværende tidspunkt har mange producenter været i stand til at udføre 40 cyklusser af forstærkning på ca. 30 minutter).

Hvis laboratorieforholdene er gode, og zoneinddelingen er streng, er det rimeligt at sige, at nøjagtighedsforskellen mellem de to ikke vil være stor.Variabel temperaturamplifikation vil imidlertid syntetisere flere nukleinsyreprodukter på relativt kortere tid.For laboratorier uden streng zoneinddeling og professionelt uddannelsespersonale vil risikoen for lækage af nukleinsyreaerosol være større, den falske positiv indtræffer, når lækagen sker, og som er ekstremt vanskelig at eliminere.

Derudover er konstant temperaturamplifikation også mere tilbøjelig til ikke-specifik amplifikation, når prøven er kompleks (den relative reaktionstemperatur er lavere, og jo højere forlængelsestemperaturen er, desto bedre er primerbindingsspecificiteten).

For så vidt angår den nuværende teknologi, er variabel temperaturforstærkning mere pålidelig.

5. Hvordan undgår man risikoen for lækage af nukleinsyreamplifikationsprodukter?
På nuværende tidspunkt vælger mange producenter PCR-røret af kirteltypen som nukleinsyrereaktionsrøret, som er forseglet ved friktion, og temperaturdenatureringen i denatureringen med variabel temperatur i PCR-amplikationen med variabel temperatur når 90 grader
Celsius.Den gentagne udvidelsesproces med varme og sammentrækning med kulde er en stor udfordring for forseglingen af ​​PCR-røret, og kirteltypen PCR-rør er relativt let at forårsage lækage.

Det er at foretrække at anvende reaktionen med et fuldstændigt forseglet kit/rør for at undgå lækage af reaktionsproduktet.Det ville være perfekt, hvis der kunne udarbejdes et fuldt forseglet kit til nukleinsyreekstraktion og detektion.

Så New Techs nye fuldautomatiske nukleinsyreekstraktions- og detektionsmaskine har ovenstående fem optimale valg.